te缓冲液影响pcr吗
不会。反而不能用双蒸水保存DNA,DNA在双蒸水中因为没有足够的离子而容易变性。
如果只是纯粹的DNA pcr,则使用常规超纯水及其配制的TE缓冲液溶解引物即可。如果要做RNA基础的PCR,如反转录pcr,qRT—PCR,则需要使用depc处理的纯水及其TE溶解引物,因为rns酶不易失活,必须depc处理。
缓冲液:缓冲液一般不容易出问题,只是使用前需要彻底融化混匀使用。温度:变性和退火温度是主要需要考虑的。模板:PCR 的关键之一,模板不是越多越好。
最后,TE 缓冲液可形成比水更为稳定的环境。此外,含有0.1 mM EDTA 的TE 缓冲液(标准TE 中含有1 mM EDTA)是一种理想的溶液,这是由于一些PCR 反应对EDTA 的灵敏度可能有一些残存。
TE Buffer对DNA测序反应有影响。TE Buffer能增加DNA样品保存期间的稳定性,溶解DNA测序样品时,用灭菌蒸馏水溶解最好。
因此,需要检查缓冲液的pH值是否正确。缓冲液过期:PCR反应需要使用新鲜的缓冲液,如果缓冲液过期了,可能会导致PCR反应不稳定,甚至无法进行。因此,需要检查缓冲液的保存时间是否在有效期内。
TE缓冲液的配制方法
) 1 M Tris-HCl (pH 0) 50 ml的配制:称取Tris碱06 g,加超纯水40 ml溶解,滴加浓HCl约1 ml调pH至0,定容至50 ml。
×TAEBuffer配制方法:称量Tris242g,Na2EDTA.2H2O32g于1L烧杯中;向烧杯中加入约800ml去离子水,充分搅拌均匀;3加入51ml的冰乙酸,充分溶解;加去离子水定容至1L后,室温保存。
组份浓度 1 M Tris-HCl 配制量 1L 配制方法:称量121 g Tris置于l L烧杯中。加入约800 ml的去离子水,充分搅拌溶解。 按下表加入浓HCl量调节所需要的pH值。
Tris-HCl缓冲液的配制方法:使50ml 0.1mol/L三羟甲基氨基甲烷(Tris)溶液与x ml 0.1mol/L 盐酸混匀后,加水稀释至100ml即可配置成功。
溶菌酶比较稳定的,酸碱耐受性都挺好,所以直接用TE溶解就可以了,配成20mg/ml的储存浓度,使用的时候终浓度1-2mg/ml就行了。 tris直接用DEPC水配就可以了。
Tris-HCl缓冲液的配制方法:Tris:三羟甲基氨基甲烷 三羟甲基氨基甲烷(Tris(hydroxymethyl)aminomethane,一般简称为Tris)是一种有机化合物,其分子式为(HOCH2)3CNH2。
为什么DNA要保存在TE缓冲液中?如果缓冲液中不加EDTA行不行?
为了 不使dna降解,溶液中必须含有edta螯合剂 以便螯合dna水解酶的辅酶,此外,dna在酸性条件下易降解,因此 需要给予碱性环境。随意buffer 都是含有edta的碱性溶液。
TE缓冲液的作用及用途:对DNA的碱基有保护性,包括提取好的DNA也要放在TE缓冲液中保存。PH缓冲系统对维持生物的正常pH值,正常生理环境起重要作用。
在基因操作实验中,选择缓冲液的主要原则是考虑DNA的稳定性及缓冲液成分不产生干扰作用。
太高时就会造成过大的电流使胶发热甚至熔化。 (3)电泳缓冲液还有一个组分是EDTA,加入浓度为1-2mmol/L,目的是螯合Mg2+ 等离子,防止电泳时激活 DNA酶,此外还可防止Mg2+离子与核酸生成沉淀。
保持dna中细胞的盐分含量维持在一个正常的水平,利于样品的保存和后续研究。
质粒DNA为何保存在TE缓冲液中
TE中含有的EDTA可以螯合金属离子,从而使DNase失活。而Tris-HCl的作用主要是维持一定碱性PH值,有助于DNA的溶解和稳定。一般长期保存需要TE缓冲液比较好,短期应用的可以使用ddH2O,有助于DNA连接等效果。
TE缓冲液的作用及用途:对DNA的碱基有保护性,包括提取好的DNA也要放在TE缓冲液中保存。PH缓冲系统对维持生物的正常pH值,正常生理环境起重要作用。
有的要求高离子浓度,有的则要求低盐浓度,采用Tris-HCl(pKa=0)的缓冲系统,由于缓冲液是TrisH+/Tris,不存在金属离子的干扰作用,故在提取或保存DNA时,大都采用Tris-HCl系统,而TE缓冲液中的EDTA更能稳定 。
不使dna降解,溶液中必须含有edta螯合剂 以便螯合dna水解酶的辅酶,此外,dna在酸性条件下易降解,因此 需要给予碱性环境。随意buffer 都是含有edta的碱性溶液。
NaOH:核酸在pH大于5,小于9的溶液中,是稳定的。但当pH12或pH3时,就会引起双链之间氢键的解离而变性。在溶液II中的NaOH浓度为0.2mo1/L,加抽提液时,该系统的pH就高达16,因而促使染色体DNA与质粒DNA的变性。
像Mg离子是DNA酶的辅酶,用EDTA将其鳌合,避免了DNA酶的干扰;TE溶液主要是用来保存你提取的DNA;SDS主要是裂解血红细胞的;至于浸泡缓冲液、STE缓冲液我到没用过,希望我说的会对你有用。
TETAE缓冲液用途区别
A、TE缓冲液:一般用作溶解剂或保持剂,常用于溶解DNA,能稳定储存DNA。B、TAE缓冲液:生物学中使用最广泛的核酸电泳缓冲液,主要用于DNA的琼脂糖凝胶电泳。
TAE是用乙酸配的,TBE是用硼酸配的。TAE对后续试验没有影响但是分辨率比较低,TBE存在硼离子会对一些酶的活性稍有影响但是分辨率较高。TAE有乙酸缓冲能力差,TBE缓冲能力比较好。
区别如下:TAE是用乙酸配的 ,TBE是用硼酸配的 。TAE对后续试验没有影响,但是分辨率比较低,TBE存在硼离子,会对一些酶的活性稍有影响,但是分辨率较高。TAE有乙酸,缓冲能力差,TBE缓冲能力比较好。
他俩的区别是:TAE: 缓冲容量小,但是溶解性能好,可以配成高浓度储备液,使用方便;TBE: 缓冲容量大,可以较长时间再换一次,但是溶解性不好,通常只配 ...2X 储备液,或者直接用粉剂配,使用不方便。
(2)电泳缓冲液的另一个作用是使溶液具有一定的导电性,以利于DNA分子的迁移,例如,一般电泳缓冲液中应含有0.01-0.04mol/L的Na+离子,Na+离子的浓度太低时电泳速度变慢;太高时就会造成过大的电流使胶发热甚至熔化。
TE缓冲溶液的配置和作用?
1、TE缓冲液是由Tris和EDTA配制而成,主要用于溶解核酸,能稳定储存DNA和RNA。TE缓冲液是一种能在加入少量酸或碱时抵抗pH改变的溶液。PH缓冲系统对维持生物的正常pH值,正常生理环境起重要作用。
2、TE缓冲液是Tris+EDTA缓冲液,这种缓冲液我们一般用作溶解剂或保持剂,主要是调控PH,TAE是一种电泳缓冲液,主要用于DNA分子的电泳。
3、缓冲溶液主要用于控制某些反应的反应条件即酸碱性,有的化学反应在不同的酸碱性条件下,反应进行的程度或生成的组分不相同,为了使反应向正反应方向进行,提高反应的转化率,在反应溶液中加入缓冲溶液达到以上要求的效果。
4、缓冲溶液具有缓冲作用的原因:因为常用的缓冲溶液由弱酸及其共轭酸盐组合而成,当加入酸时,弱酸盐部分转化为弱酸;当加入碱时,弱酸部分转化为弱酸盐。